Objetivos:
Brucella melitensis es un patógeno zoonótico que afecta a economlas en desarrollo en todo el mundo y cuyo control es esencial para el bienestar animal y humano. B. ovis, aunque no es zoonótica, también está muy extendida y causa fallo reproductivo en ovejas.
B.melilensis Rev1 es la única vacuna recomendada contra ambos patógenos. Aunque interfiere en el serodiagnóstico, esto se minimiza vacunando por vla conjuntiva! y no es un problema en programas de vacunación masiva, que la única estrategia de control aplicable en palses en desarrollo. Sin embargo, Rev1 es resistente a la estreptomicina (tratamiento de brucelosis humana) y, dado su tropismo genital típico de Brucella, es abortiva, dos problemas que dificultan la vacunación masiva. Por ello, Rev1 se prohibe alll donde B.melitensis es erradicada, con el consiguiente resurgimiento de 8.ovis. Dado que la protección con Rev1 es óptima, el primer objetivo será minimizar su efecto abortivo y eliminar su resistencia a la estreptomicina manteniendo su capacidad inmunizante. Eliminaremos genes específicos para desactivar el metabolismo de sustratos conocidos (eritritol) o propuestos (glicerol, lactato y glutamato) relacionados con el tropismo genital. Validaremos in vitro estos mutantes metabólicos y sus combinaciones, así como su atenuación/protección en modelos de laboratorio. Haremos lo mismo sobre una 8.melitensis virulenta por si las mutaciones por sí mismas proporcionaran atenuación adecuada.
Para Rev1, nuestros resultados preliminares muestran que la mutación rpsL descrita solo explica parcialmente su resistencia a la estreptomicina. Investigaremos cómo corregir esta resistencia y su efecto sobre la atenuación, lo que nos permitirá combinar la sensibilidad a la estreptomicina con mutaciones metabólicas apropiadas para generar derivados seguros de Rev1 y probarlos en ovejas gestantes. Continuaremos nuestra investigación sobre vacunas de B. ovis, que puedan ser aplicadas cuando Rev1 se prohíbe, al no interferir en el diagnóstico. Descubrimos que la vacunación subcutánea de ovejas con el mutante rugoso (R) de B.melitensis H38-wbkF protege contra B. ovis sin interferir en las pruebas diagnósticas oficiales de B.melilensis. Aunque es un gran avance, aún tenemos que probar su seguridad en animales adultos y minimizar la interferencia en el serodiagnóstico de B.ovis. Para ello, primero exploraremos si, al igual que en otras vacunas de Brucella, la ruta conjuntiva! es más segura y minimiza la interferencia serológica. Como estrategia DIVA alternativa, estudiaremos el mutante H38-wbkF-wadB, con R-LPS modificado. Además, para cumplir con los requisitos legales de algunos países afectados por 8.ovis sobre vacunas potencialmente zoonóticas, continuaremos nuestra investigación sobre los mecanismos de virulencia de B. ovis estudiando dos aspectos de su fisiología, el metabolismo del carbono y los sistemas de adquisición de metales, con el objetivo de desarrollar mutantes atenuados candidatos a vacunas. También exploraremos las posibilidades que ofrecen 8.suis biovar 2 y B.microti, no zoonóticas. En esto, nos basaremos en proyectos anteriores sobre el metabolismo de 8.suis biovar 2 y mutantes LPS,aplicando este conocimiento a B.microti y estudiaremos en modelos de inmunidad innata si podemos modular su interacción con elsistema inmune para desarrollar nuevas vacunas. Finalmente, proponemos continuar con la investigación sobre la mejora de las limitaciones actuales de las herramientas de diagnóstico.
